आइसोप्रोपैनोल के साथ प्रोटीन या प्रोटीन को कैसे ठीक करें?

जैव रासायनिक प्रयोगों में, डाना और प्रोटीन की वर्षा एक बहुत ही महत्वपूर्ण ऑपरेशन है, जो नमूनों से शुद्ध लक्ष्य पदार्थों को निकालने में मदद करता है। इसकी सरल और कुशल विशेषताओं के कारण, आइसोप्रोपेन और प्रोटीन निकालने के लिए आम तकनीकों में से एक बन गया है। प्रोटीन या प्रोटीन को बढ़ाने के लिए आइसोप्रोल अल्कोहल का उपयोग कैसे करें? यह लेख इस प्रक्रिया को बेहतर ढंग से समझने में आपकी मदद करने के लिए इसके सिद्धांत, ऑपरेशन चरणों और अनुप्रयोग क्षेत्रों का विस्तार से विश्लेषण करेगा।

डीएनए या प्रोटीन की आइसोप्रोपेनोल वर्षा के मूल सिद्धांत

आइसोप्रोपेनॉल वर्षा विधि का सिद्धांत विलायक की ध्रुवीयता में परिवर्तन पर आधारित है। निष्कर्षण प्रक्रिया के दौरान, आइसोप्रोपैनोल का जोड़ समाधान की ध्रुवीयता को कम करता है, जिससे एक अवक्षेप बनाने के लिए घोल से डाना या प्रोटीन अणुओं के एकत्रीकरण को बढ़ावा मिलता है। Dna के लिए, यह एक नकारात्मक चार्ज के साथ एक बड़ा अणु है। जब समाधान में नमक की एकाग्रता अधिक होती है, तो आइसोप्रोपैनोल के अतिरिक्त से dna अणु के हाइड्रेशन को कम कर देगा और इसे वाष्पीकृत करने का कारण बनता है। प्रोटीन के मामले में, आइसोप्रोपेन के आसपास हाइड्रेशन वातावरण को बदलकर एकत्रीकरण और वर्षा का कारण बन सकता है।

आइसोप्रोपेनॉल के साथ डीना को कैसे ठीक करें

डाना वर्षा में प्रमुख कदम

1. कोशिकाओं का रिसाव और डाना का निष्कर्षण: कोशिकाओं को भौतिक या रासायनिक तरीकों से प्रभावित होता है। इस प्रक्रिया में, एक बफर का उपयोग डीएनए अणु को स्थिर करने में मदद करने के लिए किया जा सकता है।

2. नमक और आइसोप्रोपेनोल का जोड़नाः समाधान की आयनिक शक्ति को बढ़ाने और डाना की वर्षा को बढ़ावा देने के लिए समाधान में जोड़ा जाता है। इसके बाद आइसोप्रोपैनॉल की एक ही मात्रा को जोड़ा गया और धीरे से हिलाया गया।

3. अवक्षेप dna: इस बिंदु पर, dna एकत्र करना शुरू कर देता है और एक अवक्षेप बनाता है। 10-30 मिनट के लिए कम तापमान (उदाहरण के लिए, -20 Patc) पर खड़े होने की अनुमति देकर डाना की वर्षा को आगे बढ़ाया जा सकता है।

4. Dna अवक्षेप एकत्र करने के लिए अपकेंद्रितः मिश्रण होता है और अवक्षेप dna होता है। अशुद्धियों को दूर करने के लिए 70% इथेनॉल से धोया जा सकता है।

सावधानियां

• आइसोप्रोपैनोल के अलावा, मिश्रण को डाना विखंडन को रोकने के लिए जोरदार झटकों से बचना चाहिए।
• Dna का अवक्षेप प्रभाव नमक की एकाग्रता और आइसोप्रोपेन के वॉल्यूम अनुपात से निकटता से संबंधित है, जिसे विशिष्ट स्थिति के अनुसार समायोजित किया जाना चाहिए।

आइसोप्रोपैनॉल के साथ प्रोटीन को कैसे ठीक करें

प्रोटीन वर्षा में प्रमुख चरण

1. प्रोटीन निष्कर्षण: प्रोटीन को पहली बार कोशिकाओं या ऊतकों से निकाला जाता है, आमतौर पर कोशिकाओं से प्रोटीन को छोड़ने के लिए Lysate या सेल व्यवधान विधि का उपयोग करता है।

2. आइसोप्रोपैनोल जोड़ः आइसोप्रोपैनोल को प्रोटीन समाधान में जोड़ा जाता है, आमतौर पर 30% और 70% के बीच एक एकाग्रता पर। आइसोप्रोपैनोल के अलावा प्रोटीन के आसपास हाइड्रेशन वातावरण को बाधित करता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रोटीन वर्षा होती है।

3. प्रोटीन की वर्षा: dna वर्षा के समान, प्रोटीन की वर्षा को कम तापमान उपचार (-20) द्वारा बढ़ावा दिया जा सकता है। यह आमतौर पर 1 घंटे या उससे अधिक के लिए छोड़ दिया जाता है।

4. प्रोटीन का अपकेंद्रीकरण और संग्रह: सेंट्रीफ्यूज द्वारा, अवक्षेप, I 1. ब्याज का प्रोटीन एकत्र किया जाता है। अवक्षेप धोने से कुछ विघटित अशुद्धियों को हटा सकता है और प्रोटीन शुद्धता में सुधार कर सकता है।

सावधानियां

• विभिन्न प्रोटीन के लिए, वर्षा की स्थिति अलग हो सकती है, जैसे कि नमक एकाग्रता, आइसोप्रोपेन एकाग्रता, तापमान, आदि प्रयोगात्मक स्थितियों को प्रयोगात्मक वस्तु की विशेषताओं के अनुसार समायोजित करने की आवश्यकता होती है।
• प्रोटीन के क्षरण को रोकने के लिए अत्यधिक आंदोलन से बचने की आवश्यकता होती है।

आइसोप्रोपेनॉल वर्षा के फायदे और नुकसान

फायदे

• आसान ऑपरेशन: आइसोप्रोपेनोल वर्षा विधि एक कम लागत और कुशल पृथक्करण तकनीक है जो विभिन्न प्रयोगों के लिए उपयुक्त है।
• व्यापक प्रयोज्यतायह dna, Rna, प्रोटीन और अन्य मैक्रोमोलेक्यूल्स के निष्कर्षण पर लागू किया जा सकता है।
• उच्च शुद्धताउचित धोने के चरणों द्वारा, अपेक्षाकृत शुद्ध लक्ष्य अणु प्राप्त किए जा सकते हैं।

नुकसान

• आवेदन का सीमित दायराकुछ विशेष dna या प्रोटीन नमूनों के लिए, आइसोप्रोपेन वर्षा विधि प्रभावी नहीं हो सकती है और अन्य तरीकों के साथ संयोजन में उपयोग किया जाना चाहिए।
• संभावित नुकसानआइसोप्रोपेनोल वर्षा प्रक्रिया के दौरान, लक्ष्य अणु शारीरिक रूप से क्षतिग्रस्त हो सकता है, विशेष रूप से अनुचित हैंडलिंग के दौरान।

अनुप्रयोग क्षेत्र

आइसोप्रोल अल्कोहल वर्षा का व्यापक रूप से जीव विज्ञान, चिकित्सा, खाद्य विज्ञान और अन्य क्षेत्रों में किया जाता है। विशेष रूप से आनुवंशिक इंजीनियरिंग, प्रोटीन विश्लेषण, दवा अनुसंधान, आदि में, आइसोप्रोपेनॉल वर्षा नमूना निष्कर्षण के लिए एक सरल और कुशल समाधान प्रदान करता है।

सारांश

Dna या प्रोटीन को स्थापित करने के लिए आइसोप्रोपेनॉल का उपयोग कैसे करें, सबसे पहले उचित तापमान स्थितियों के तहत नमक की एकाग्रता और आइसोप्रोपेन के वॉल्यूम अनुपात को नियंत्रित करने के लिए उचित प्रयोगात्मक चरणों के माध्यम से अपने मूल सिद्धांत को समझने की आवश्यकता है। डीएनए और प्रोटीन दोनों की वर्षा से बचने या लक्ष्य अणु को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए प्रयोग करने वाले द्वारा सावधानीपूर्वक हेरफेर की आवश्यकता होती है। इस सरल और प्रभावी तकनीक के माध्यम से, शोधकर्ता विभिन्न प्रयोगों में वांछित अणुओं को कुशलतापूर्वक पृथक और शुद्ध कर सकते हैं।