कैसे आइसोप्रोपानोल ने dna को स्थापित कियाः सिद्धांत और अनुप्रयोग

डीएनए निष्कर्षण और शुद्धिकरण आणविक जीवविज्ञान प्रयोगों में महत्वपूर्ण कदम हैं। कोशिकाओं या ऊतकों से शुद्ध dna निकालने के लिए, विभिन्न रासायनिक अभिकर्मकों और प्रक्रियाएं आमतौर पर आवश्यक होती हैं। आइसोप्रोपेनॉल वर्षा एक सामान्य और प्रभावी डाना वर्षा तकनीक है, जिसका व्यापक रूप से विभिन्न जैविक प्रयोगों में किया जाता है। आइसोप्रोपेनोल डीना कैसे करता है? यह लेख अपने सिद्धांत, ऑपरेशन चरणों और आवेदन को विस्तार से प्रस्तुत करेगा।

आइसोप्रोपैनोल के साथ dna अवक्षेप का सिद्धांत

Dna अणुओं की लंबी श्रृंखलाओं से बना होता है, जो आमतौर पर पानी या नमकीन घोल में भंग होता है। जब आइसोप्रोपेन जोड़ा जाता है, तो समाधान में ध्रुवीयता बहुत बदल जाती है। आइसोप्रोपैनोल की गैर-ध्रुवीय प्रकृति का कारण बन जाता है, जिससे घोल में dna की विलेयता कम हो जाती है। इस समय, dna अणु कुल मिलाकर और वर्षा करेंगे।

आइसोप्रोपेनोल डाना की प्रक्रिया में दो प्रमुख भूमिका निभाता हैः

1. विध्रुवण प्रभावआइसोप्रोपैनोल के अतिरिक्त पानी की ध्रुवीयता को कम करता है, ताकि dna अणुओं को समाधान में नहीं रखा जा सके, जिससे इसकी वर्षा को बढ़ावा मिलता है।
2. नमक आयनों की मदद सेडीना निकालने पर, नमक (जैसे सोडियम क्लोराइड या अमोनियम क्लोराइड) आमतौर पर जोड़े जाते हैं। नमक की भूमिका dna अणु पर नकारात्मक चार्ज को बेअसर करना, अणुओं के बीच इलेक्ट्रोस्टैटिक प्रतिकर्षण को कम करना और अवक्षेप करना आसान बनाना है।

प्रक्रिया: आइसोप्रोपैनोल के साथ डीना को कैसे ठीक करें

आइसोप्रोपैनोल का उपयोग करके dna वर्षा के लिए प्रयोगात्मक प्रक्रिया अपेक्षाकृत सरल है, लेकिन समाधान स्थितियों के सटीक नियंत्रण की आवश्यकता होती है। मानक संचालन प्रक्रिया निम्नलिखित हैः

1. डीएनए समाधान की तैयारीDna को पहली बार कोशिकाओं या ऊतकों से निकाला जाता है, आमतौर पर एक एललिसिस समाधान (जैसे ट्रिस, एड्टा, nacl, आदि) का उपयोग करके कोशिका झिल्ली को बाधित करने और dna को जारी करने के लिए। फिर, एक सुपरनैंट प्राप्त करने के लिए सेल मलबे को हटा दिया गया था।
2. नमक घोल जोड़ेंDna के अवक्षेप प्रभाव को बढ़ाने के लिए, सुपरनैंट में नमक समाधान की एक उचित मात्रा जोड़ें। आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले लवण सोडियम क्लोराइड (nacl) या अमोनियम क्लोराइड (nh4cl) होते हैं, जो dna अणुओं के नकारात्मक चार्ज को बेअसर करने और dna अवक्षेप की दक्षता में सुधार करने में मदद करते हैं।
3. आइसोप्रोल अल्कोहल जोड़ें: Dna समाधान के लिए समाधान की मात्रा के बराबर या उसके करीब आइसोप्रोपेन जोड़ें और धीरे से मिश्रण करें। इस बिंदु पर, dna अणुओं को चालू करना शुरू कर देगा।
4. डाना पेलेट को सेंट्रीफ्यूज: मिश्रित समाधान को एक सेंट्रीफ्यूज और सेंट्रीफ्यूज में कम गति पर रखें, आमतौर पर 8000-12000 r/मिनट, और लगभग 10-15 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें। इस बिंदु पर, एक dna अवक्षेपण ट्यूब के तल पर दिखाई देगा।
5. सफाई और विघटन: सुपरनैंट को ध्यान से हटा दें और अवशिष्ट लवण और अन्य अशुद्धियों को हटाने के लिए 70% इथेनॉल के साथ dna पैलेट धोएं। अंत में, पेलेट को बाद के विश्लेषण के लिए एक उपयुक्त समाधान (जैसे, टी बफर या पानी) में भंग कर दिया जाता है।

आइसोप्रोपैनोल के साथ dna वर्षा के लाभ और सीमाएं

लाभ

1. सरल और सरलआइसोप्रोपेनोल वर्षा विधि संचालित करने के लिए सरल है और जटिल उपकरणों और उपकरणों की आवश्यकता नहीं है।
2. दक्षता: उचित नमक एकाग्रता की स्थिति में, आइसोप्रोपैनोल उच्च शुद्धता के साथ प्रभावी रूप से dna को ठीक कर सकता है, जो अधिकांश dna निष्कर्षण प्रयोगों के लिए उपयुक्त है।
3. कम लागतअन्य dna शुद्धिकरण विधियों की तुलना में, आइसोप्रोपैनोल की उपयोग लागत कम है, और यह छोटे और मध्यम आकार की प्रयोगशालाओं के लिए उपयुक्त है।

सीमाएं

1. हो सकता है प्रदूषणयदि प्रयोग ठीक से नहीं किया जाता है, तो यह dna का क्षरण हो सकता है या अन्य अशुद्धियों में ला सकता है।
2. सभी नमूनों पर लागू नहींकुछ विशेष नमूनों में dna अत्यधिक वर्षा के कारण पुनर्प्राप्त करना मुश्किल हो सकता है, या नमूना में अन्य अघुलनशील पदार्थों के कारण वर्षा प्रभाव खराब हो सकता है।

प्रयोगों में आम समस्याएंः dna के आइसोप्रोपेनॉल वर्षा में विफलता के कारण

हालांकि डीना निष्कर्षण में आइसोप्रोपेनॉल वर्षा बहुत आम है, यह संभव है कि वर्षा विफल हो जाती है। सामान्य कारणों में शामिल हैंः

1. अनुचित नमक एकाग्रताबहुत कम नमक की एकाग्रता से dna अणुओं की अपूर्ण वर्षा हो सकती है; बहुत अधिक नमक की एकाग्रता बहुत अधिक नमक के साथ dna की अपूर्ण वर्षा हो सकती है।
2. आइसोप्रोल अल्कोहल का गलत अनुपातसमाधान के लिए आइसोप्रोपैनोल वॉल्यूम का गलत अनुपात dna वर्षा को प्रभावित कर सकता है। सामान्य तौर पर, आइसोप्रोपैनोल की मात्रा dna समाधान की मात्रा 1 गुना होनी चाहिए।
3. अपर्याप्त केन्द्रापसारक गतियदि अपकेंद्रीकरण गति बहुत कम है या समय बहुत कम है, तो dna पूरी तरह से वाष्पित नहीं हो सकता है। यह सुनिश्चित करना आवश्यक है कि कुशल dna वसूली सुनिश्चित करने के लिए अपकेंद्रीकरण की शर्तें पर्याप्त रूप से कठोर हैं।

सारांश

आइसोप्रोपेनोल वर्षा द्वारा dna का निष्कर्षण एक सरल और कुशल विधि है। इस सिद्धांत को समझने के सिद्धांत को समझना कि कैसे आइसोप्रोपेनोल, सही ऑपरेशन चरणों में महारत हासिल करना, और संभावित प्रयोगात्मक समस्याओं पर काबू पाने से शोधकर्ताओं को dna निष्कर्षण और शुद्धिकरण को बेहतर ढंग से करने में मदद मिल सकती है। हालांकि इस विधि का व्यापक रूप से कई प्रयोगों में उपयोग किया जाता है, इसे उच्च गुणवत्ता वाले डीएनए नमूने प्राप्त करने के लिए विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार ऑपरेशन विवरण को समायोजित करने की आवश्यकता है।