Isopropanol로 DNA 또는 단백질을 침전시키는 방법?

생화학 실험에서 DNA와 단백질의 침전은 매우 중요한 작업이며 샘플에서 순수한 표적 물질을 추출하는 데 도움이됩니다. 간단하고 효율적인 특성으로 인해 이소프로판올 침전은 DNA와 단백질을 추출하는 일반적인 기술 중 하나가되었습니다. 이소 프로필 알코올을 사용하여 DNA 또는 단백질을 침전시키는 방법은 무엇입니까? 이 기사에서는이 프로세스를 더 잘 이해할 수 있도록 원리, 운영 단계 및 응용 프로그램 필드를 자세히 분석합니다.

DNA 또는 단백질의 이소프로판올 침전의 기본 원리

이소프로판올 침전 방법의 원리는 용매의 극성 변화에 기초한다. 추출 과정에서 이소프로판올의 첨가는 용액의 극성을 감소시켜 용액으로부터 DNA 또는 단백질 분자의 응집을 촉진시켜 침전물을 형성한다. DNA의 경우 음전하를 가진 큰 분자입니다. 용액 중 염 농도가 높을 때, 이소프로판올의 첨가는 DNA 분자의 수화를 감소시키고 침전시킬 것이다. 단백질의 경우, 이소프로판올은 단백질 주위의 수화 환경을 변화시킴으로써 응집 및 침전을 일으킬 수 있다.

Isopropanol로 DNA를 침전시키는 방법

DNA 침전의 핵심 단계

1. 세포의 용해 및 DNA 추출: 세포를 물리적 또는 화학적 방법으로 용해시켜 DNA를 방출시킨다. 이 과정에서, 완충제를 사용하여 DNA 분자를 안정화시킬 수 있다.

2. 염 및 이소프로판올의 첨가: 용액의 이온 강도를 증가시키고 DNA의 침전을 촉진하기 위해 적절한 양의 염 (예: 염화나트륨 또는 염화칼슘) 을 용액에 첨가한다. 이어서, 동일한 부피의 이소프로판올을 첨가하고 부드럽게 흔들었다.

3. 침전 된 DNA: 이 시점에서 DNA는 응집되어 침전물을 형성하기 시작합니다. DNA의 침전은 10-30 분 동안 저온 (예를 들어, -20 ℃) 에서 방치함으로써 더욱 촉진될 수 있다.

4. DNA 침전물을 수집하기 위한 원심분리: 혼합물을 원심분리하고 침전물은 DNA이다. DNA 펠릿을 70% 에탄올로 세척하여 불순물을 제거할 수 있다.

주의 사항

• 이소프로판올을 첨가한 후, 혼합물은 DNA 단편화를 방지하기 위해 격렬한 흔들림을 피해야 한다.
• DNA의 침전 효과는 소금의 농도와 이소프로판올의 부피 비율과 밀접한 관련이 있으며, 이는 특정 상황에 따라 조정되어야합니다.

이소프로판올로 단백질을 침전시키는 법

단백질 침전의 핵심 단계

1. 단백질 추출: 단백질은 먼저 세포 또는 조직에서 추출되며, 일반적으로 세포에서 단백질을 방출하기 위해 용해물 또는 세포 파괴 방법을 사용합니다.

2. 이소프로판올 첨가: 이소프로판올을 단백질 용액에 전형적으로 30% 내지 70% 의 농도로 첨가한다. 이소프로판올의 첨가는 단백질 주변의 수화 환경을 방해하여 단백질 침전을 초래합니다.

3. 단백질의 침전: DNA 침전과 유사하게, 단백질의 침전은 저온 처리 (-20 ℃) 에 의해 촉진될 수 있다. 일반적으로 냉각 된 조건에서 1 시간 이상 방치됩니다.

4. 원심분리 및 단백질 침전물의 수집: 원심분리에 의해, 침전물, I. E., 관심 단백질이 수집된다. 침전물을 세척하면 일부 용해된 불순물을 제거하고 단백질 순도를 개선할 수 있다.

주의 사항

• 다른 단백질의 경우, 염 농도, 이소프로판올 농도, 온도 등과 같은 침전 조건이 다를 수 있습니다. 실험 조건은 실험 대상의 특성에 따라 조정해야합니다.
• 단백질 침전은 단백질 분해를 방지하기 위해 과도한 교반을 피할 필요가 있습니다.

이소프로판올 강수량의 장점과 단점

장점

• 쉬운 조작: 이소프로판올 침전 방법은 다양한 실험에 적합한 저비용 및 효율적인 분리 기술이다.
• 넓은 적용 가능성그것은 DNA, RNA, 단백질 및 기타 거대 분자의 추출에 적용될 수 있습니다.
• 고순도: 적절한 세척 단계에 의해, 비교적 순수한 표적 분자가 수득될 수 있다.

단점

• 제한된 적용 범위: 일부 특수 DNA 또는 단백질 샘플의 경우, 이소프로판올 침전 방법은 효과적이지 않을 수 있으며 다른 방법과 함께 사용해야합니다.
• 가능한 손실: 이소프로판올 침전 과정 동안, 표적 분자는 특히 부적절한 취급 중에 물리적으로 손상될 수 있다.

응용 분야

이소 프로필 알코올 침전은 생물학, 의학, 식품 과학 및 기타 분야에서 널리 사용됩니다. 특히 유전 공학, 단백질 분석, 제약 연구 등에서 이소프로판올 침전은 샘플 추출을위한 간단하고 효율적인 솔루션을 제공합니다.

요약

DNA 또는 단백질을 침전시키기 위해 이소프로판올을 사용하는 방법은 적절한 온도 조건 하에서 염의 농도와 이소프로판올의 부피 비율을 조절하기위한 합리적인 실험 단계를 통해 기본 원리를 이해해야합니다. DNA와 단백질의 침전은 불순물 도입 또는 표적 분자의 손상을 피하기 위해 실험자에 의한 신중한 조작이 필요합니다. 이 간단하고 효과적인 기술을 통해 연구자들은 다양한 실험에서 원하는 분자를 효율적으로 분리하고 정화 할 수 있습니다.