Mengapa Isopropanol digunakan apabila DNA diekstrak

Mengapa Isopropanol digunakan apabila DNA diekstrak?

Dalam proses pengekstrakan DNA, isopropanol (Isopropanol) adalah salah satu reagen yang biasa digunakan dan biasanya digunakan untuk langkah-langkah pemendakan DNA. Mengapa Isopropanol digunakan apabila DNA diekstrak? Soalan ini melibatkan prinsip tindak balas kimia, kesederhanaan operasi dan peranannya yang unik dalam eksperimen. Artikel ini akan menganalisis secara terperinci peranan penting isopropanol dalam proses pengekstrakan DNA.

1. Isopropanol membantu pemendakan DNA

Dalam proses pengekstrakan DNA, ekstrak biasanya mengandungi penyangga yang melarutkan membran sel, asid nukleik dan komponen sel lain. DNA itu sendiri dibubarkan dalam larutan air atau garam, dan untuk mengasingkan DNA dari campuran, bahan kimia tertentu mesti digunakan untuk memendapkan. Isopropanol adalah salah satu agen pemendapan biasa.

Polariti isopropanol rendah. Berbanding dengan air, isopropanol dapat mengurangkan kesan penghidratan dalam larutan dengan berkesan, sehingga membolehkan molekul DNA berkumpul untuk membentuk pemendakan. Dalam proses ini, garam dalam larutan (seperti natrium klorida) dan isopropanol bertindak bersama untuk memisahkan DNA dari larutan dengan berkesan, yang sesuai untuk pemulihan dan analisis berikutnya.

2. Isopropanol mudah dikendalikan dan mempunyai volatiliti yang lebih rendah

Isopropanol mempunyai kemudahan operasi yang tinggi dalam pengekstrakan DNA. Isopropanol mempunyai volatiliti yang lebih rendah berbanding dengan agen pemendapan lain seperti etanol, yang bermaksud bahawa ia tidak menguap dengan cepat pada suhu bilik dan lebih stabil semasa operasi. Kepekatan isopropanol biasanya antara 70% dan 100%, yang membolehkannya memberikan kesan yang stabil dalam proses pemendakan DNA dan mengelakkan masalah pemendakan yang tidak lengkap yang disebabkan oleh kepekatan larutan etanol yang terlalu tinggi atau terlalu rendah.

Struktur molekul isopropanol menjadikan kelarutannya berbeza dengan air dan meningkatkan kecekapan pemendakan DNA. Oleh itu, apabila menggunakan isopropanol untuk pengekstrakan DNA, kesan pemendakan lebih baik, operasi lebih efisien, dan kesalahan dalam proses eksperimen dikurangkan.

3. Isopropanol dapat melindungi DNA dari degradasi

Dalam proses pengekstrakan DNA, keadaan molekul DNA dalam larutan agak rapuh dan terdedah kepada degradasi enzim (seperti DNase). Penambahan isopropanol dapat mengurangkan masa molekul DNA terdedah kepada persekitaran luaran dan kemungkinan pendedahan kepada air, dengan itu mengurangkan aktiviti enzim degradasi seperti DNase dan melindungi molekul DNA dari kerosakan.

Penambahan isopropanol juga dapat mengurangkan aktiviti air dalam larutan dan mengurangkan kadar tindak balas hidrolisis dalam larutan, sehingga dapat mengelakkan penurunan DNA. Ini juga merupakan salah satu sebab penting mengapa isopropanol dipilih sebagai agen pemendapan dalam banyak eksperimen pengekstrakan DNA.

4. Sinergi antara isopropanol dan reagen lain

Dalam proses pengekstrakan DNA, isopropanol sering bekerjasama dengan reagen lain seperti garam (natrium klorida, kalium klorida, dll.) Dan penyangga untuk membentuk keadaan pemendakan yang ideal. Garam boleh meneutralkan caj negatif pada permukaan molekul DNA dan meningkatkan daya tarikan bersama antara molekul DNA. Isopropanol seterusnya mendorong pengumpulan dan pemendakan DNA dengan mengurangkan kekutuban larutan.

Sinergi ini dapat memastikan bahawa DNA diasingkan dengan berkesan dari campuran sel kompleks untuk mendapatkan sampel DNA berkualiti tinggi. Ini menjadikan isopropanol sebagai sebahagian daripada eksperimen pengekstrakan DNA.

Kesimpulan

Mengapa Isopropanol digunakan apabila DNA diekstrak? Isopropanol mempunyai pelbagai kelebihan dalam pengekstrakan DNA. Ia bukan sahaja membantu pemendakan DNA, tetapi juga mudah dioperasikan, dapat melindungi DNA dengan berkesan dari degradasi, dan bekerjasama dengan reagen lain untuk memastikan kecekapan dan kemurnian pengekstrakan DNA. Oleh itu, isopropanol menjadi reagen utama yang sangat diperlukan dalam proses pengekstrakan DNA.