Bagaimana untuk menghilangkan pencemaran fenol di rna

Cara menghilangkan pencemaran fenol dalam RNA: analisis dan kaedah terperinci

Dalam proses pengekstrakan RNA, fenol adalah pelarut organik yang biasa digunakan, yang dapat menghilangkan lipid dan protein dalam sel dengan berkesan. Sisa fenol boleh mempengaruhi hasil eksperimen seterusnya, terutamanya kesucian dan kestabilan RNA. Oleh itu, bagaimana membuang pencemaran fenol dalam RNA adalah masalah penting dalam eksperimen biologi molekul. Artikel ini akan menganalisis secara terperinci bagaimana untuk menghapuskan pencemaran fenol dalam RNA dengan berkesan dan menyediakan kaedah yang berdaya maju.

Kesan pencemaran fenol pada eksperimen RNA

Pencemaran fenol boleh menjejaskan kualiti dan kesucian RNA. Phenol digunakan untuk memecahkan sel dan mengasingkan RNA semasa proses pengekstrakan RNA, tetapi jika tidak dikendalikan dengan betul, fenol mungkin kekal dalam sampel RNA. Sisa fenol tidak hanya mengganggu pengukuran penyerapan RNA, tetapi juga dapat menyebabkan degradasi RNA, yang mempengaruhi eksperimen berikutnya, seperti PCR transkripsi terbalik (RT-PCR) dan Blot Utara. Phenol sangat menjengkelkan dan menghakis, dan sisa fenol juga menimbulkan risiko tertentu terhadap kesihatan eksperimen.

Bagaimana untuk membuang pencemaran fenol dalam RNA

Pembuangan pencemaran fenol dalam RNA biasanya bergantung kepada beberapa kaedah biasa:

1. Pengekstrakan berlapis dengan kaedah empar

Pengekstrakan berlapis sentrifugal adalah kaedah yang paling biasa untuk menghilangkan pencemaran fenol. Dalam proses pengekstrakan RNA, pemisahan selanjutnya boleh dilakukan dengan sentrifugasi selepas fasa air berlapis dengan fasa organik. RNA biasanya terdapat dalam fasa air manakala fenol dan pelarut organik lain berkumpul di lapisan fasa organik. Semasa operasi, kelajuan dan masa sentrifugal yang sesuai dapat digunakan untuk memastikan lapisan fenol dipisahkan sepenuhnya dari lapisan RNA. Kaedah ini mudah dan berkesan dan dapat menghilangkan pencemaran fenol dengan berkesan.

2. Tambahkan kloroform untuk pengekstrakan sekunder

Selepas pengekstrakan RNA, kloroform boleh ditambah untuk pengekstrakan sekunder. Kloroform dicampurkan dengan fenol untuk menghilangkan fenol dan kekotoran lain dari sampel. Semasa operasi, setelah menambahkan kloroform, perlahan-lahan menggegarkan sampel dan melakukan sentrifugal untuk memisahkan fasa air, fenol dan lapisan kloroform. Kaedah ini dapat menghilangkan pencemaran fenol dengan lebih teliti dan mengurangkan kehilangan kemurnian RNA.

3. Kaedah dialisis untuk menghilangkan fenol

Sekiranya pencemaran fenol dalam sampel RNA lebih serius, ia dapat dikeluarkan dengan dialisis. Melalui kebolehtelapan selektif filem dialisis, molekul fenol dalam larutan dapat dikeluarkan dengan berkesan. Kelebihan kaedah dialisis adalah bahawa ia dapat menghilangkan pencemaran fenol sambil memastikan bahawa RNA tidak rosak, sangat sesuai untuk sampel dengan residu fenol yang lebih tinggi.

Kaedah lain untuk membuang fenol

Sebagai tambahan kepada kaedah konvensional di atas, terdapat beberapa teknik lain untuk menghilangkan fenol, seperti:

• Kaedah penjerapan resin: Dengan menggunakan resin khas untuk menyerap fenol, pencemaran fenol dapat dihilangkan tanpa mempengaruhi RNA.
• Kaedah ultrafiltrasi: Menggunakan membran ultrafiltrasi dengan pemotongan berat molekul yang sesuai dapat menghilangkan pencemaran molekul kecil seperti fenol dengan berkesan.

Kaedah ini boleh dipilih mengikut keperluan eksperimen tertentu.

Kesimpulan: Bagaimana untuk membuang pencemaran fenol dalam RNA?

Mengeluarkan pencemaran fenol dari RNA adalah langkah utama untuk memastikan kesucian RNA dan kejayaan eksperimen. Pengekstrakan berlapis sentrifugal, penambahan kloroform untuk pengekstrakan sekunder, dialisis dan kaedah konvensional lain, digabungkan dengan keadaan makmal tertentu, dapat menghilangkan pencemaran fenol dalam RNA dengan berkesan, sehingga meningkatkan kebolehpercayaan dan ketepatan hasil eksperimen. Menguasai kaedah ini untuk menghilangkan pencemaran fenol adalah penting untuk memastikan kualiti eksperimen biologi molekul yang tinggi.